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紫外可見(jiàn)分光光度計的應用

發(fā)布日期:2023-05-24     作者:紫外可見(jiàn)分光光度計的應用     瀏覽:2387次

  UV-Vis已發(fā)現其適用于許多用途和情況,包括但不限于:

  1、DNA和RNA分析

  快速驗證RNA和DNA的純度和濃度是一種特別廣泛的應用。下表1中給出了分析中使用的波長(cháng)及其指示的摘要。在制備DNA或RNA樣品時(shí),例如用于測序等下游應用時(shí),通常重要的是要驗證其中一個(gè)樣品沒(méi)有被其他,或從分離過(guò)程中攜帶的蛋白質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)。

  260nm/280nm吸光度(260/280)比值可用于揭示核酸樣品中可能存在的污染,如下表2所示。純DNA的260/280比值通常為1.8,而純RNA的比值通常為2.0.純DNA的260/280比值低于RNA,因為在RNA中被尿嘧啶取代的胸腺嘧啶的260/280比值低于尿嘧啶。由于280nm處的吸光度較高,被蛋白質(zhì)污染的樣品會(huì )降低260/280比值。

  260nm/230nm吸光度(260/230)比率也可用于檢查DNA和RNA樣品的純度,并可揭示蛋白質(zhì)或化學(xué)污染。蛋白質(zhì)可以吸收230nm的光,從而降低260/230比率并指示DNA和RNA樣品中的蛋白質(zhì)污染。硫氰酸胍和異硫氰酸胍是純化核酸中常用的兩種化合物,在230nm處有強烈吸收,這也會(huì )降低260/230的吸光度比值。

  2、藥物分析

  UV-Vis光譜最常見(jiàn)的用途之一是在制藥行業(yè)。使用數學(xué)導數處理UV-Vis光譜允許解析原始光譜中的重疊吸收峰以識別單個(gè)藥物化合物。例如,苯佐卡因(一種局部麻醉劑)和金霉素(一種抗生素)可以通過(guò)將第一個(gè)數學(xué)導數應用于吸光度光譜,同時(shí)在商業(yè)獸用粉末制劑中進(jìn)行鑒定。通過(guò)為每種化合物構建校準函數,可以在微克/毫升的濃度范圍內同時(shí)定量這兩種物質(zhì)。

  3、細菌培養

  紫外可見(jiàn)分光光度計常用于細菌培養。OD測量通常使用600nm的波長(cháng)快速進(jìn)行,以估計細胞濃度并跟蹤生長(cháng)。600nm是常用和優(yōu)選的,因為它們在其中生長(cháng)的細菌培養基的光學(xué)特性以及避免在需要繼續實(shí)驗的情況下?lián)p壞細胞。

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